1. Načelo delovanja G418 presejalnih celic 293T
G418 je neomicinski antibiotik, ki moti sintezo znotrajceličnih beljakovin in s tem povzroči celično smrt. Vendar lahko celice z genom za odpornost na neomicin proizvajajo proteine odpornosti, da se uprejo toksičnosti G418. Zato lahko v gojišču, ki vsebuje G418, preživijo in rastejo le celice z genom za odpornost na neomicin.
2. Vpliv koncentracije G418 na celice 293T
Učinek koncentracije G418 na celice 293T je večplasten, vključno z rastjo celic, viabilnostjo celic, morfologijo celic in odpornostjo celic. Specifični učinki koncentracije G418 na celice 293T se kažejo predvsem v naslednjih vidikih:
1. Rast celic: Pri nižjih koncentracijah G418 (kot je 0.25 mg/ml) lahko celice 293T normalno rastejo, gostota celic se postopoma povečuje, morfologija pa ostaja dobra. S povečanjem koncentracije G418 (kot 0.5 mg/ml) se začne hitrost rasti celic upočasnjevati in gostota celic počasi narašča. Ko koncentracija G418 doseže 1 mg/ml, začnejo nekatere celice odmirati in celična gostota se znatno zmanjša. Z nadaljnjim povečevanjem koncentracije G418 (na primer 2 mg/ml) je celična smrt resnejša in celična gostota se zmanjša. 2. Viabilnost celic: Višja kot je koncentracija G418, nižja je viabilnost celic. Pri nizkih koncentracijah G418 (kot je 0.25 mg/ml) je sposobnost preživetja celic visoka, celična morfologija polna in obarvanje enakomerno. Ko koncentracija G418 narašča, se viabilnost celic postopoma zmanjšuje, celična morfologija postane nepravilna in obarvanje je neenakomerno. Pri visokih koncentracijah G418 (kot je 2 mg/ml) je sposobnost preživetja celic nizka, celična morfologija je močno poškodovana in obarvanje je nenormalno.
3. Morfologija celice: Višja kot je koncentracija G418, bolj nepravilna je morfologija celic. Pri nizkih koncentracijah G418 je morfologija celic debela, vretenasta ali ploščata. Ko se koncentracija G418 poveča, morfologija celic postane nepravilna, volumen celic se zmanjša in robovi celic so nejasni. Pri visokih koncentracijah G418 je celična morfologija resno poškodovana, telo celice je izredno majhno, robovi celic pa zlomljeni.
4. Odpornost celic: Višja kot je koncentracija G418, močnejša je odpornost celic. Pri nizkih koncentracijah G418 so celice bolj občutljive na G418 in so nagnjene k celični smrti. Ko se koncentracija G418 poveča, celice postopoma razvijejo odpornost in stopnja preživetja celic se poveča. Pri visokih koncentracijah G418 celična odpornost doseže vrh in celice se lahko uprejo toksičnosti visokih koncentracij G418.
Zato je za celice 293T presejalna koncentracija G418 običajno med 1-2 mg/ml. To koncentracijo je mogoče prilagoditi glede na eksperimentalne zahteve. Na splošno velja, da višja kot je presejalna koncentracija, boljši je učinek presejanja, vendar bo povzročil tudi določene poškodbe celic. Zato je treba pri izbiri presejalne koncentracije pretehtati namen eksperimenta in celično toleranco. Pri dejanskem delovanju lahko začnete z nižjo koncentracijo, kot je 0,5 mg/ml, opazujete rast celic in postopoma povečujete koncentracijo, dokler ne najdete ustrezne presejalne koncentracije.