Ne vem, če imate potrebo po pogostem nakupu potrošnega materiala. Če ste pogosti kupec laboratorijskega potrošnega materiala, boste morda ugotovili, da lahko različni proizvajalci svoje izdelke označijo kot brez encimov, brez pirogenov in brez endotoksinov, zlasti kadar gre za nekatera. To še posebej velja za potrošni material za celično biologijo in analitično biologijo, kot so običajne 15 ml in 50 ml centrifugalne epruvete, steklenice za celične kulture, posode za celične kulture, plošče za celične kulture, kriogene epruvete, plošče za PCR in drugi izdelki. Izdelki s temi opisi so lahko tudi dražji od običajnih podobnih izdelkov. Kaj torej pomenijo te izjave in kakšen vpliv imajo na naše poskuse? Tukaj je kratek uvod v to, kako naj izbiramo pri nakupu.
Pirogen: Pirogen se nanaša na pirogeno snov, ki lahko povzroči nenormalno zvišanje telesne temperature po vbrizganju v telo. Pirogeni v širšem smislu vključujejo bakterijske pirogene, endogene visokomolekularne pirogene, endogene nizkomolekularne pirogene in kemične pirogene. Tukaj omenjeni "pirogeni" se v glavnem nanašajo na bakterijske pirogene, ki so metaboliti nekaterih mikroorganizmov, bakterijskih trupel in endotoksinov.
Encimi: Vsi so se učili o encimih v srednji šoli. Kot neke vrste biološki katalizatorji lahko encimi učinkovito katalizirajo različne biokemične reakcije v naših organizmih. Ko pa večina izdelkov piše, da so brez encimov, se pravzaprav, natančneje, ne nanašajo na vse encime, temveč na nukleaze. Mnogi proizvajalci pišejo tudi brez DNaze in Brez RNaze, kar pomeni isto. Nukleaze lahko razgradijo molekule nukleinske kisline. Obstajajo encimi, ki specifično razgradijo DNA ali RNA. Obstajajo tudi manj specifični encimi, ki lahko delujejo tako na molekule DNK kot RNK.
Endotoksini: Endotoksini so splošno ime za strupene snovi, prisotne v celicah po Gramu negativnih bakterij. Je sestavni del celične stene različnih gramnegativnih bakterij. Toksin, ki se sprosti z lizo bakterij, je lipopolisaharid. Na splošno velja, da je endotoksin vrsta pirogena, kar je splošno sprejeto med proizvodnjo zdravil: če ni endotoksina, ni pirogena. Zato se lahko med proizvodnjo izvaja samo endotoksinsko testiranje brez pirogenega testiranja.
Vpliv:
Pirogeni in endotoksini lahko stimulirajo telo in povzročijo, da se segreje. Na farmacevtskem, kliničnem in drugih področjih zaradi varnosti ljudi običajno obstajajo zahteve glede količine pirogenov in endotoksinov. Kitajska farmakopeja zagotavlja tudi jasne metode za odkrivanje pirogenov in endotoksinov. Ko so nukleaze vključene v molekularne laboratorije, ker imajo funkcijo razgradnje DNA, bodo verjetno razgradile fragmente ciljne molekule. Na primer, pri poskusih PCR, če pride do kontaminacije z nukleazami, morda ni vrednosti CT, kar ima za posledico lažno pozitivne rezultate. Zato so potrošni materiali, kot so konice za pipete in zaloge, povezane s PCR, običajno brez nukleaze.
Glede odkrivanja pirogenov in endotoksinov:
Sledi kratek uvod v vsebino testiranja pirogenov in endotoksinov v farmakopeji.
Odkrivanje pirogena: Splošno poglavje kitajske farmakopeje 1142 opisuje uporabo kunčje metode za odkrivanje pirogena. Uporabite zdrave in usposobljene kunce, kuncem intravensko injicirajte določen odmerek testnega izdelka in v določenem času opazujte dvig telesne temperature kuncev. Preskusni pripomočki, ki so v stiku s preskusnim izdelkom, morajo biti sterilni in apirogeni. Sterilizacija s suho toploto (250 stopinj, več kot 30 minut) se običajno uporablja za odstranjevanje pirogenov, lahko pa se uporabijo tudi druge ustrezne metode. Če se telesna temperatura testiranega kunca v določenem časovnem obdobju dvigne do določenega standarda, se test pirogenosti preskusnega izdelka šteje za neskladnega.
Odkrivanje endotoksina: Odkrivanje endotoksina je bilo pred tem mednarodno opravljeno z uporabo reagentne metode Limulus. Posebne metode vključujejo gelsko metodo in fotometrično metodo. Reagent Limulus lahko aglutinira z bakterijskim endotoksinom, da povzroči gel ali spremembo motnosti, vsebnost endotoksina pa je mogoče določiti z merjenjem te spremembe. Reagent Limulus je reagent, ekstrahiran iz krvi morskega členonožca podkovnjaka. Zato se podkovnjaki množično lovijo po svetu in so pri nas postali nacionalna zavarovana žival druge stopnje. Trenutno je FDA odobrila metodo rekombinantnega faktorja C, ki nadomešča reagent Limulus. Ta zakon je bil omenjen tudi v vodilnih načelih farmakopeje moje države.
Kako izbrati:
Pravzaprav se po razumevanju teh konceptov ni težko odločiti. Glavna stvar je, da izberete glede na lastne potrebe. Na splošno so potrošni materiali brez encimov in pirogenov pogostejši, medtem ko so izdelki brez endotoksinov relativno redki. Če sam poskus nima visokih zahtev za te, lahko dejansko uporabite navaden potrošni material. Na primer, pri centrifugiranju, če gre za centrifugirane celice ali sorodne komponente, je najbolje uporabiti centrifugalne epruvete brez encimov in pirogenov, če pa gre le za navadno tekočino, lahko centrifugiranje dejansko izvajamo v navadni centrifugalni epruveti. Poleg tega je to tudi težava, ki jo bo imelo veliko uporabnikov. Pri nakupu epruvet za centrifugo pri nekaterih trgovcih bodo vprašali, ali je epruveto za centrifugo mogoče ponovno uporabiti. To vprašanje je pravzaprav odvisno od situacije, saj je bila cev za centrifugo enkrat uporabljena. Do določene mere je kontaminiran in tudi sterilizacija s paro pod pritiskom teh kontaminacij ne more popolnoma odpraviti. Torej, če se ponovno uporabi, je to odvisno od uporabnikovih lastnih potreb po poskusu.
V končni analizi vsi izdelki služijo eksperimentatorjem in eksperimentom. Zaradi izdelkov ne morete vplivati na svoje poskuse. Namesto tega morate izbrati ustrezne izdelke na podlagi lastnih poskusov.