Pasaža celic se nanaša na proces delitve celic na manjše dele, njihovega ponovnega sejanja v drugo posodo za kulturo in njihovega ponovnega gojenja. Bučke za celične kulture so pogosto uporabljen potrošni material med pasiranjem. Kateri so torej posebni koraki za prehod celic?
1. Vzemite bučko s celično kulturo iz inkubatorja, z alkoholno razpršilno bučko razpršite 75-odstotni alkohol na površino bučke in jo prenesite na ultra čisto mizo.
2. Odprite pokrov bučke s celično kulturo, nežno aspirirajte stari medij, dodajte ustrezno količino pufrske raztopine PBS s Pasteurjevo pipeto, sperite 1-2-krat in zavrzite raztopino pufra PBS.
3. Bučko s celično kulturo lahko s pipeto dopolnite z 1-2 ml tripsina in "križ" pretresete, da se popolnoma dotakne tripsina in celic.
4. Bučko s celično kulturo, ki vsebuje tripsin, prenesite na obrnjeno mizico mikroskopa, opazujte prebavo celic pod mikroskopom in ko se celice zaokrožijo in veliko število odpade, se pripravite na prekinitev prebave. Razpršite 75-odstotni alkohol na površino bučke in jo prenesite na ultra čisto mizo.
5. Bučka za celično kulturo se dopolni z enako količino medija, ki vsebuje serum, in prebava se zaključi. Pipeto do konca izpihamo in udarjamo, da celice popolnoma odpadejo.
6. Prenesite mešano tekočino v bučki za celično kulturo v epruveto za centrifugo, jo uravnotežite in centrifugirajte približno 5 minut.
7. Ko je bučka s celično kulturo centrifugirana, površino centrifugalne epruvete poškropite z alkoholno pršilno bučko, jo prenesite na izjemno čisto mizo, odprite pokrov in nalijte supernatant v valj za odpadno tekočino.
8. Dodajte ustrezno količino medija, ki vsebuje serum, v bučko za celično kulturo in ga nežno stepajte s pipeto ali Pasteurjevo pipeto, da pripravite celično suspenzijo.
9. Razdelite celično suspenzijo v 2 (ali več) sterilnih in čistih bučkah za celično kulturo, dodajte ustrezno količino gojišča in zaprite pokrov.
10. Razdeljene bučke s celično kulturo postavite na obrnjeno mizico mikroskopa in opazujte stanje celic. Število celic mora biti zagotovljeno. Premalo celic bo vplivalo na njihovo rast.
11. Na bučko s celično kulturo naredite nalepko z navedbo časa prehoda, vrste celice, operaterja in drugih informacij. Preden jo daste v inkubator, popršite nekaj alkohola na površino bučke, uredite operacijsko mizo, obrišite izjemno čisto mizo s 75-odstotnim alkoholom ter očistite odpadno tekočino in smeti.
Zgoraj je specifičen postopek celične pasaže z uporabo bučk za celične kulture. Pri operaciji je treba paziti na nošenje sterilnih oblačil, sterilnih rokavic in mask, celoten poseg pa je treba opraviti aseptično, da preprečimo kontaminacijo celic.
na citratne krvne epruvete, cev za ločevanje edta, nefiltrirane konice pipet, proizvajalec konic pipet z gelom